PCR檢測試劑盒有效期一般為1年，這是指在適當?shù)膬Υ鏈囟认隆：怂釘U增部分的試劑一般要貯存于-20℃下，產(chǎn)物檢測部分試劑則貯存于2-8℃。盡量避免反復凍融。上海

產(chǎn)品名稱：嗜吞噬細胞無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱：Anaplasma phagocytophilum

產(chǎn)品貨號：LZ-P3221

分類：PCR檢測試劑盒

儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。

運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

【結(jié)果分析條件設定】

u 基線（Baseline）設定：應選擇該次實驗指數(shù)擴增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域（所有樣本熒光信號無較大波動），起始點（Start）應避開熒光采集起始階段的信號波動，終止點（End）應比早出現(xiàn)指數(shù)擴增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán)，建議基線設為6~15。

u 閾值(Threshold)設定：將閾值線設定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴增曲線的高點。

【質(zhì)控標準】

1.  陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應為陰性，無指數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct；

2.   陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應為陽性，有明顯的指數(shù)擴增期，Ct值應小于等于35；

3.   以上要求需在一次實驗中同時滿足，否則該次實驗視為無效。

【結(jié)果判斷】

1.  R陽性：有明顯的指數(shù)擴增期，且Ct＜38；

2.可疑：有明顯的指數(shù)擴增期，且38≤Ct<40，此時樣本為可疑樣本；對于可疑樣本建議復核一次，若復核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴增期，則判定為陽性，否則判定為陰性；

3.   陰性：無指數(shù)擴增期，Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。

PCR反應的特異性決定因素為：

　　?、僖锱c模板DNA特異正確的結(jié)合；

　　?、趬A基配對原則；

　　?、跿aq DNA聚合酶合成反應的忠實性；

　　?、馨谢虻奶禺愋耘c保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2)靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板?？芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

PCR檢測步驟:

1、嗜吞噬細胞無漿體(無形體)樣品處理

1）按照GB 4789.10-2016（或SN/T 1870-2016），取樣品25g（mL），加入到含有225mL 7.5% NaCl肉湯的無菌容器中均質(zhì)，調(diào)節(jié)pH至6.8±0.2。

2）36±1℃培養(yǎng)18-24h。

注：也可參考其他地方標準進行樣品的前處理。

2、核酸提取

1）取40μL增菌液于裂解液管中，98℃或沸水浴10min。

2）冷卻至室溫，吸取上清備用或者置于-20℃保存。

3、反應體系配置

從試劑盒中取出SA預混液，充分融化，短暫離心，然后將陰性對照、樣品的DNA提取液、陽性對照各取5μL分別加入PCR管中，蓋好管蓋，短暫離心，立即進行PCR擴增反應。

4、PCR擴增

PCR管置于PCR儀上，推薦反應程序設定如下：反應體系為25μL，在第二步每個循環(huán)60℃時檢測熒光信號，檢測通道選擇FAM。

探針法熒光定量PCR公司正在出售的產(chǎn)品：

人膠原交聯(lián)(PYD)ELISA

小鼠谷酸脫羧酶自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)試劑盒 Mouse glamic acid decarboxylase aoaibody IgG,GAD-Ab-IgG ELISA Kit

血小板源性生長因子D(PDGF-D)PCR檢測試劑盒 ， PDGF-D ELISA Kit

MouseCalretinin,CRPCR檢測試劑盒小鼠鈣結(jié)合蛋白(CR)PCR檢測試劑盒

ELISAKitβ-glucosidase小鼠β葡糖苷酶規(guī)格：48T/96T

DuckIerleukin-8,IL-8ELISAKit鴨白介素8(IL-8/CXCL8)PCR檢測試劑盒

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phospho-ASK1 (Ser966) 英文名稱： 0酸化細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 0.1ml

Anti-CEA /FITC 熒光素標記癌胚抗原抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

嗜吞噬細胞無漿體(無形體)探針法熒光定量PCR試劑盒Anti-CD329/SIGLEC9/FITC 熒光素標記唾液酸結(jié)合性樣凝集素9抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

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Goat Anti-Chicken IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的羊抗雞IgG 0.1ml

Phospho-FGFR1(Tyr653 + Tyr654) 英文名稱： 0酸化堿性成纖維細胞生長因子受體1抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh PPAR gamma 過氧化酶活化增生受體γ抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-AT1R/RBITC 紅色羅丹明標記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2mg

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