牛冷球蛋白(CG)ELISA試劑盒

要求

做好對照

正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特反應，可采用羊、兔或BSA等封閉。

實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多可作為固相載體，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被（或抗原）的選擇：將（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記工作濃度的選擇：用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度）在正式實驗里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

進口分裝：

檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。

試劑盒的曲線

試劑盒的曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。

試劑盒重復性好，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均＜9 %。

試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。

檢測及酶結(jié)合物的稀釋度(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，實驗結(jié)果的重復性。

白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種形成,它的特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導和基于和白介素3協(xié)同作用的等,也備受關(guān)注. 并且已證實白介素-6與病理學存在的相關(guān)關(guān)系.例如,報道多種的生長因子為白介素-6, 瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性和自身發(fā)揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠和細胞基質(zhì)上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 10.94的 700 pg/mL 預期用途

ELISA法是診斷中的一項新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、病及非傳染病等方面的診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定，而且也可用于測定中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大，

ELISA的基礎是抗原或的固相化及抗原或的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或仍保持其學活性，酶標記的抗原或既保留其學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的或抗原）與固相載體表面的抗原或起反應。用洗滌的使固相載體上形成的抗原復合物與中的其他分開。再加入酶標記的抗原或，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了反應的結(jié)果，使測定達到很高的度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定。

操作：

雙夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3.　加酶標：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.　終止反應：于各反應孔中加入2M0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用觀察結(jié)果：反應孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。

主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA檢測試劑盒,標準品,生化試劑

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