線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶試劑盒微量法說明書

微量法 100管/96樣   

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

商品屬性：

產(chǎn)品名稱：線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶試劑盒微量法

貨號：LZ-S016

規(guī)格 : 100管/96樣

測試方法:微量法

產(chǎn)品分類：輔酶Ⅰ系列

發(fā)貨地：上海

測定意義:

復合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ，同時可使O2還原生成O2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài)，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài)。

測定原理:

復合體Ⅰ能夠催化NADH脫氫生成NAD+，在340nm下測定NADH的氧化速率計算出該酶活性的大小。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一：液體 100mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：液體 20mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑三：液體 1.5mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑四：液體 25mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑五：液體 1mL×1 支，-20℃保存；

試劑六：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 2mL 蒸餾水；用不完的試劑分裝后-20℃保存，

禁止反復凍融。

臨用前將試劑五轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保

存，禁止反復凍融。

樣本的前處理：

組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

① 準確稱取 0.1g 組織或收集 500 萬細胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

② 將勻漿 600g，4℃離心 5min。

③ 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。

④ 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅰ（此步可選做）。

⑤ 步驟④中的沉淀即為線粒體，加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10 秒，重復 30 次），用于復合體Ⅰ酶活性測定。

生化檢測試劑盒操作步驟：

一、?準備工具和環(huán)境?：確保操作臺面干凈、整潔，這是進行科學實驗的步。杭州

?二、?仔細閱讀說明書?：這是使用試劑盒的基礎(chǔ)，說明書包含了所有必要的信息和操作指南。

三、樣本采集?：按照說明書的指導，正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。

?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產(chǎn)生泡沫，以確保檢測的準確性。

?五、?等待反應(yīng)?：混合后，耐心等待試劑盒的反應(yīng)，這個時間可以用來進行其他活動，但不要著急，因為好的結(jié)果值得等待。

六、結(jié)果判讀?：時間到后，仔細判讀結(jié)果。試劑盒通常會有明確的指示，告訴你如何根據(jù)顯示的線條或顏色來判斷結(jié)果。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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注意事項:

①加入試劑的順序應(yīng)一致,以所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。