過氧化氫酶（CAT）試劑盒（鉬酸銨比色法）微量法說明書

微量法 100管/48樣 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

商品屬性：

產(chǎn)品名稱：過氧化氫酶（CAT）試劑盒（鉬酸銨比色法）微量法

貨號：LZ-S0148

規(guī)格 : 100管/48樣

測試方法:微量法

產(chǎn)品分類：氧化與抗氧化系列

發(fā)貨地：上海

測定意義:

CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是主要的H2O2清除酶，在活性氧清除系統(tǒng)中具有重要作用。

測定原理:

過氧化氫能氧化MoO42-成MoO52-,MoO52-接受氫氧根的電子成鍵，分子間立即脫水縮合，得到穩(wěn)定的黃色復(fù)合物(H2MoO4·XH2O)n在405nm處有強烈吸收峰，其吸光值和過氧化氫濃度成線性關(guān)系。測定出體系剩余過氧化氫在405nm的吸光值即可反映CAT的催化活性。

需自備的儀器和用品：

酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制:

提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存；

試劑二：液體 15 mL×1 瓶，常溫保存；（過飽和試劑，如有結(jié)晶析出，可 37℃加熱攪拌溶解）

試劑三：液體 30 mL×1 瓶，4℃保存；(過飽和試劑，如有絮狀沉淀，可 37℃加熱攪拌溶解

NAD+和 NADH 的提取:

1 血清（漿）中 NAD+和 NADH 的提取NAD+的提取：按照血清（漿）體積（mL）：酸性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1mL 血清（漿），加入 1mL 酸性提取液），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。NADH 的提?。喊凑昭澹{）體積（mL）：堿性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1mL 血清（漿），加入 1mL 堿性提取液），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2 組織中 NAD+和 NADH 的提?。篘AD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1g組織，加入 1mL 酸性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

NADH 的提取：按照組織質(zhì)量（g）：堿性提取液體積（mL）為 1：5~10 的比例（建議取約 0.1g

組織，加入 1mL 堿性提取液），冰浴研磨，60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3 細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提?。篘AD+的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內(nèi)，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：酸性提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 酸性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。NADH 的提取：先收集細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：堿性提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 堿性提取液），超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次），60℃水浴 5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min；取 500μL 上清液，加入 500μL 酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

生化檢測試劑盒操作步驟：

一、?準備工具和環(huán)境?：確保操作臺面干凈、整潔，這是進行科學(xué)實驗的步。

?二、?仔細閱讀說明書?：這是使用試劑盒的基礎(chǔ)，說明書包含了所有必要的信息和操作指南。

三、樣本采集?：按照說明書的指導(dǎo)，正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。

?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產(chǎn)生泡沫，以確保檢測的準確性。

?五、?等待反應(yīng)?：混合后，耐心等待試劑盒的反應(yīng)，這個時間可以用來進行其他活動，但不要著急，因為好的結(jié)果值得等待。

六、結(jié)果判讀?：時間到后，仔細判讀結(jié)果。試劑盒通常會有明確的指示，告訴你如何根據(jù)顯示的線條或顏色來判斷結(jié)果。 

公司正在出售的產(chǎn)品：

復(fù)制

注意事項:

①加入試劑的順序應(yīng)一致,以所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。