牛嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素D(CYPD)ELISA試劑盒 檢測速度快

要求

做好對照

正式試驗時，應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特反應(yīng)，可采用羊、兔或BSA等封閉。

實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多可作為固相載體，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被（或抗原）的選擇：將（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記工作濃度的選擇：用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度）在正式實驗里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

進口分裝：

檢測范圍和靈敏度不同，用量少時，可使用分裝，前期是它的長久性不是很好。

試劑盒的曲線

試劑盒的曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98。

試劑盒重復(fù)性好，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均＜9 %。

試劑的組份都多給20%的富余量，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況。

檢測及酶結(jié)合物的稀釋度(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作，實驗結(jié)果的重復(fù)性。

白介素6是一種細胞因子,已被證實為B細胞分化因子.它是一種形成,它的特性,如肝細胞急性蛋白合成的誘導(dǎo)和基于和白介素3協(xié)同作用的等,也備受關(guān)注. 并且已證實白介素-6與病理學(xué)存在的相關(guān)關(guān)系.例如,報道多種的生長因子為白介素-6, 瘤細胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性和自身發(fā)揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠和細胞基質(zhì)上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 10.94的 700 pg/mL 預(yù)期用途

HBsAg試劑特點（檢測：臨床夾心法）：包被為山羊多抗。多抗具有高親和性和對抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表為與HBsAg有不同結(jié)合位點的鼠復(fù)合單位，可測得HBsAg變異樣品，檢測的特（99.98%）檢測的靈敏度，應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說（PEI）HBsAg品，對ad品的靈敏度為0.05ng/ml對ay品靈敏度為0.025ng/ml

測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原之間的特異結(jié)合反應(yīng)，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原，酶等。以前用于測定的抗原通常為各種純化抗原，而則為純化抗原動物后的多克隆和使用雜交瘤技術(shù)的單克隆，而抗原或的標記物如酶標結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成制備。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，使用基因工程制備各種特殊的抗原或及其酶結(jié)合物等測定試劑幾成為現(xiàn)實的新一代試劑，各種新型使用的測定也不斷出現(xiàn)。

操作：

雙夾心法

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個聚板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

2.　加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3.　加酶標：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4.　加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5.　終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M0.05ml。

6.　結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

間接法

1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌；

4.（同時做空白、陰性及陽性孔對照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.一遍用DDW洗滌。

其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。